公开(公告)号：CN107446900A

公开(公告)日：2017-12-08

申请号：CN201710776849.1

申请日：2015-04-28

申请人： 湖南汇升生物科技有限公司

发明人： 吴敬 ,  宿玲恰 ,  张悦

IPC分类号： C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12P19/12

CPC分类号： C12N9/1051 ,  C12P19/12 ,  C12Y204/01245

摘要： 本发明公开了一种海藻糖合酶及其制备方法和应用，属于基因工程和酶工程领域。本发明将Thermobifida fusca YX的海藻糖合酶活性中心附近第289位的谷氨酸突变成甘氨酸得到突变体E289G；将第295位的组氨酸突变成天冬酰胺突变体H295N；将第344位的甲硫氨酸突变成赖氨酸突变体M344K；将第367位的甲硫氨酸突变成亮氨酸突变体M367L，并在H295N基础上进行双突变得到突变体H295N/E289G、H295N/M344K、H295N/M367L、H295N/M344K/M367L。突变体实现了底物中即使含有一定的葡萄糖，海藻糖合酶制备海藻糖的转化效率依然不会受到很大的影响，具有较高的工业价值。

公开(公告)号：CN108753746A

公开(公告)日：2018-11-06

申请号：CN201810568782.7

申请日：2018-06-05

申请人： 江南大学

发明人： 吴敬 ,  宿玲恰 ,  陈春 ,  封金云

IPC分类号： C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P19/18 ,  C12P19/12

CPC分类号： C12N9/1051 ,  C12N15/70 ,  C12P19/12 ,  C12P19/18 ,  C12Y204/01245

摘要： 本发明公开了一种热稳定性提高的麦芽寡糖基海藻糖合成酶突变体，属于酶工程以及蛋白质工程技术领域。本发明的麦芽寡糖基海藻糖合成酶突变体是通过将麦芽寡糖基海藻糖合成酶的一个氨基酸位点进行突变，得到了与亲本麦芽寡糖基海藻糖合成酶相比更高的热稳定性。本发明的麦芽寡糖基海藻糖合成酶突变体在50℃的半衰期比野生型增加41h，是野生型的2倍，即本发明的麦芽寡糖基海藻糖合成酶突变体的稳定性较野生型提高了2倍。

公开(公告)号：CN107058201A

公开(公告)日：2017-08-18

申请号：CN201710058443.X

申请日：2017-04-24

申请人： 江南大学

发明人： 吴敬 ,  宿玲恰 ,  王魁

IPC分类号： C12N1/21 ,  C12N9/10 ,  C12N9/24 ,  C12N15/54 ,  C12N15/56 ,  C12P19/16 ,  C12P19/14 ,  C12P19/12 ,  C12R1/19

CPC分类号： C12N9/1051 ,  C12N9/2402 ,  C12P19/12 ,  C12P19/14 ,  C12P19/16 ,  C12Y204/01245 ,  C12Y302/01141

摘要： 本发明公开了一种提高MTSase和MTHase产量的方法，属于发酵工程和酶工程技术领域。本发明提供了一种表达MTSase和/或MTHase的重组大肠杆菌，以此重组大肠杆菌发酵生产MTSase和MTHase，并应用于制备海藻糖，具有比较好的效果。本发明的优点在于首次将Athrobacter ramosus S34来源的MTSase和MTHase基因在E.coli BL21(DE3)中表达，且经发酵优化酶产量较高。同时创造性地将MTSase和MTHase同时在一株菌中表达，并且经过发酵优化具有较高产量。重组两种酶共同作用生产海藻糖，产海藻糖水平稳定、原料来源广泛，生产成本较低。

公开(公告)号：CN107988092A

公开(公告)日：2018-05-04

申请号：CN201711103922.5

申请日：2017-11-10

申请人： 天津科技大学

发明人： 骆健美 ,  王敏 ,  申雁冰 ,  宋昭玉 ,  薛海洁 ,  崔芳芳 ,  王艳霞 ,  夏梦雷

IPC分类号： C12N1/20 ,  C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N15/74 ,  C12P33/02 ,  C12R1/06

CPC分类号： C12R1/06 ,  C07K14/195 ,  C12N9/0065 ,  C12N9/0089 ,  C12N9/1051 ,  C12N9/14 ,  C12P33/02 ,  C12Y111/01006 ,  C12Y115/01001 ,  C12Y204/01245 ,  C12Y306/04012

摘要： 本发明属于遗传育种领域，具体涉及一株具有胁迫耐受性的简单节杆菌突变菌株及由其构建的基因工程菌。其中，突变菌株在16％乙醇和20％甲醇冲击条件下的存活率比出发菌株分别提高了3.74倍和2.10倍；过表达来自突变菌株的groEL、dnaK、recA、uvrD、katG、sod或treS基因的工程菌对高浓度有机溶剂的耐受能力均明显提高，并对盐压力和氧化压力也表现出更高的耐受能力，上述工程菌应用于甾体C1,2脱氢反应可将体系中乙醇浓度提高至8-10％，底物CA浓度提高至6-8g/L，产物产量提高0.41-3.56倍，为后续的耐性机制研究和菌株分子改造与应用奠定了良好基础。

公开(公告)号：CN105838704A

公开(公告)日：2016-08-10

申请号：CN201610320569.5

申请日：2016-05-16

申请人： 南京工业大学

发明人： 江凌 ,  宋小刚 ,  黄和 ,  唐苏苏

IPC分类号： C12N11/18 ,  C12N1/21 ,  C12N9/26 ,  C12N9/10 ,  C12P19/12 ,  C12R1/19

CPC分类号： Y02P20/588 ,  C12N11/18 ,  C12N9/1051 ,  C12N9/2425 ,  C12P19/12 ,  C12Y204/01245 ,  C12Y302/01002

摘要： 本发明提供了一种纳米纤维生物膜固定化双酶系统及其催化合成海藻糖的方法。本方法在发酵产耐高温海藻糖合酶的大肠杆菌细胞表面自组装淀粉质纳米纤维生物膜，利用可基因编码的多肽标签SpyTag?SpyCatcher特异性共价结合高效固定重组β淀粉酶，自主构建海藻糖合酶—β淀粉酶双酶催化体系，最终使胞外、胞内两步催化连续进行。本方法对β淀粉酶的固定化效率可达到50%?62%；含量为20%?25%重量的可溶性淀粉在胞外经生物膜上的β?淀粉酶催化形成麦芽糖后进入细胞内与海藻糖合成酶反应生成海藻糖，固定化细胞重复利用10?16次后淀粉的转化率可达到45%?55%。

公开(公告)号：CN104877984A

公开(公告)日：2015-09-02

申请号：CN201510256646.0

申请日：2015-05-20

申请人： 江南大学

发明人： 江波 ,  沐万孟 ,  蔡雪 ,  张涛

IPC分类号： C12N9/90 ,  C12N15/61 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P19/24 ,  C12P19/12 ,  C12R1/19

CPC分类号： C12N9/1051 ,  C12N9/90 ,  C12P19/12 ,  C12P19/18 ,  C12P19/24 ,  C12Y204/01245 ,  C12Y504/99016

摘要： 本发明公开一种嗜氯节杆菌海藻糖合成酶及其编码基因和应用，属于基因工程和现代酶工程技术领域。该海藻糖合成酶的编码基因从嗜氯节杆菌（Arthrobacter Chlorophenolicus SK33.001）克隆得到，该海藻糖合成酶能一步转化麦芽糖生成海藻糖，酶的适合反应温度为20～40℃，酶的适合反应pH在6～7.5。在最适温度下，转化率可达到65%左右。该海藻糖合成酶能用于转化麦芽糖或麦芽糖浆制备海藻糖，为海藻糖的工业化生产提供了新的方法。

公开(公告)号：CN107227304A

公开(公告)日：2017-10-03

申请号：CN201710585267.5

申请日：2015-04-02

申请人： 湖南汇升生物科技有限公司

发明人： 吴敬 ,  宿玲恰 ,  吴世雄

IPC分类号： C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/63 ,  C12P19/12

CPC分类号： C12N9/1051 ,  C12P19/12 ,  C12Y204/01245

摘要： 本发明公开了一种麦芽寡糖基海藻糖合成酶突变体的制备及其应用，属于基因工程和酶工程领域。本发明是将嗜酸热硫矿硫化叶菌Sulfolobus acidocaldarius ATCC 33909麦芽寡糖基海藻糖合成酶表面疏水区域相关的氨基酸残基进行取代。所得突变体实现了麦芽寡糖基海藻糖合成酶可溶性表达量不同程度的提高，突变体M106K、M106H麦芽寡糖基海藻糖合成酶可溶性表达量分别提高了145.32％、92.38％。突变体可溶性表达的提高利于其工业化应用。

公开(公告)号：CN106399426A

公开(公告)日：2017-02-15

申请号：CN201610883479.7

申请日：2016-10-10

申请人： 长沙理工大学

发明人： 谢定 ,  郑瑞娜 ,  谢易真 ,  易翠平 ,  文李 ,  姜博 ,  杨倩圆 ,  方芳

IPC分类号： C12P19/22 ,  C12P19/18 ,  C12P19/12 ,  C12N1/19 ,  C12N1/21 ,  C12R1/84 ,  C12R1/19

CPC分类号： C12P19/22 ,  C07K14/00 ,  C12N9/1051 ,  C12P19/12 ,  C12P19/18 ,  C12Y204/01245

摘要： 合成序列为SEQ NO1金属亲和多肽BMP并展示在毕赤酵母表面构建BMP基因工程菌用于镉米降镉，合成序列为SEQ NO2的海藻糖合成酶TreS基因并构建基因工程菌用于生产海藻糖合成酶；镉米经磨浆、液化、压滤分离后得镉蛋白和液化糖浆，镉蛋白经蛋白酶分解得蛋白分解液，而液化糖浆加糖化酶后转化为麦芽糖浆；将构建的BMP基因工程菌加入到镉蛋白分解液中搅拌吸镉、离心分离后得吸镉酵母和大米蛋白肽；将该大米蛋白肽用作TerS基因工程菌的发酵培养基主成分，将其发酵扩培生产的菌液均质、破碎即得TreS粗酶液，将其加入到麦芽糖浆中进行催化反应，然后再进行相应处理，即可将镉米充分利用生产海藻糖。

公开(公告)号：CN106086107A

公开(公告)日：2016-11-09

申请号：CN201610249035.8

申请日：2016-04-20

申请人： 中国科学院微生物研究所

发明人： 林白雪 ,  袁慎键 ,  杨巍 ,  陶勇

IPC分类号： C12P19/12 ,  C12N9/24 ,  C12N9/10 ,  C12N9/26 ,  C12N15/56 ,  C12N15/54

CPC分类号： C12P19/12 ,  C12N9/1048 ,  C12N9/1051 ,  C12N9/2402 ,  C12N9/2411 ,  C12Y204/01245 ,  C12Y302/01141

摘要： 本发明公开了海藻糖的生产方法。本发明所提供的海藻糖的生产方法，包括将底物与海藻糖生产成套试剂进行反应得到海藻糖；海藻糖生产成套试剂包括麦芽寡糖基海藻糖合成酶、麦芽寡糖基海藻糖水解酶和M；M为糖基转移酶和切支酶这两种的两种或任一种；底物为淀粉或淀粉水解物；麦芽寡糖基海藻糖合成酶为SEQ ID No.1的第42‑816位所示的蛋白质；麦芽寡糖基海藻糖水解酶为SEQ ID No.3的第42‑639位所示的蛋白质；糖基转移酶为SEQ ID No.5的第42‑697位所示的蛋白质。