公开(公告)号：US5824522A

公开(公告)日：1998-10-20

申请号：US294871

申请日：1994-08-22

申请人： Yasuhiro Ikenaka ,  Hirokazu Nanba ,  Masayuki Takano ,  Kazuyoshi Yajima ,  Yukio Yamada ,  Satomi Takahashi ,  Kazuma Okubo ,  Kazuhiko Yamada ,  Yoshiro Hiraishi

发明人： Yasuhiro Ikenaka ,  Hirokazu Nanba ,  Masayuki Takano ,  Kazuyoshi Yajima ,  Yukio Yamada ,  Satomi Takahashi ,  Kazuma Okubo ,  Kazuhiko Yamada ,  Yoshiro Hiraishi

IPC分类号： C12N9/80 ,  C12N9/96 ,  C12N11/02 ,  C12N11/08 ,  C12P13/04 ,  C12P13/06 ,  C12P13/08 ,  C12P13/22 ,  C12P41/00 ,  C12N1/20 ,  C12N9/14 ,  C12N11/00

CPC分类号： C12N11/02 ,  C12N11/08 ,  C12N9/80 ,  C12N9/96 ,  C12P13/04 ,  C12P13/06 ,  C12P13/08 ,  C12P13/22 ,  C12P41/009 ,  Y10S435/849 ,  Y10S435/874

摘要： Decarbamylases are provided capable of producing D-.alpha.-amino acids by hydrolysis of N-carbamyl-D-.alpha.-amino acids. A source of the decarbamylases is recombinant microorganisms produced by gene manipulation methods. Decarbamylases having improved thermostability can be obtained in which amino acids at a thermostability-related site of a natural decarbamylase have been replaced with other amino acids by mutating a DNA fragment encoding the natural decarbamylase. Recombinant DNA is obtained from a vector DNA and a DNA fragment encoding a natural decarbamylase where the nucleic acid sequence encoding an amino acid at a thermostability-related site is replaced with a nucleic acid sequence encoding another amino acid. The recombinant DNA is used to produce transformants that produce thermostable decarbamylases. The decarbamylases may be immobilized in purified, partially-purified or crude form or in the form of decarbamylase-containing microbial cells on a support such as a polymer having ion exchange groups or covalent bonding groups. The presence of an antioxidant such as dithiothreitol results in an immobilized decarbamylase preparation that can be repeatedly used 30 times or more.

摘要翻译： 提供的脱甲酰氨基酶能够通过N-氨基甲酰基-D-α-氨基酸的水解产生D-氨基酸。 脱氨基甲酰酶的来源是通过基因操作方法产生的重组微生物。 通过突变编码天然脱氨基甲酰酶的DNA片段，可以得到具有改善的热稳定性的脱甲酰氨基磷酸酶，其中天然脱氨基甲酰酶的热稳定性相关部位的氨基酸已被其它氨基酸替代。 从载体DNA和编码天然脱氨基甲酰酶的DNA片段获得重组DNA，其中将编码热稳定性相关部位的氨基酸的核酸序列替换为编码另一氨基酸的核酸序列。 重组DNA用于产生产生热稳定性脱氨基甲酰酶的转化体。 脱氨基甲酰酶可以固定在纯化的，部分纯化的或粗制的形式中，或以含脱氨基甲酰酶的微生物细胞的形式固定在载体上，例如具有离子交换基团或共价键合基团的聚合物。 抗氧化剂如二硫苏糖醇的存在导致可重复使用30次以上的固定化脱氨基甲酰酶制剂。

公开(公告)号：US5695968A

公开(公告)日：1997-12-09

申请号：US479638

申请日：1995-06-07

申请人： Hirokazu Nanba ,  Yukio Yamada ,  Masayuki Takano ,  Yasuhiro Ikenaka ,  Satomi Takahashi ,  Kazuyoshi Yajima

发明人： Hirokazu Nanba ,  Yukio Yamada ,  Masayuki Takano ,  Yasuhiro Ikenaka ,  Satomi Takahashi ,  Kazuyoshi Yajima

IPC分类号： C12N1/21 ,  C12N9/80 ,  C12N15/55 ,  C12P13/04 ,  C12P41/00 ,  C07H19/00 ,  C12N1/20 ,  C12P21/06

CPC分类号： C12P41/009 ,  C12N9/80 ,  C12P13/04

摘要： The present invention is directed to a gene which is related to a D-N-carbamoyl-.alpha.-amino acid amidohydrolase which is an enzyme capable of converting D-N-carbamoyl-.alpha.-amino acids into D-.alpha.-amino acids; a recombinant plasmid in which a DNA fragment containing the gene is incorporated into a vector; a microorganism belonging to the genus Escherichia, Pseudomonas, Flavobacterium, Bacillus, Serratia, Corynebacterium, or Brevibacterium, which is transformed by incorporating the recombinant plasmid thereinto; a process for the production of D-N-carbamoyl-.alpha.-amino acid amidohydrolases, comprising the steps of cultivating the transformed microorganism and collecting the desired product therefrom; a D-N-carbamoyl-.alpha.-amino acid amidohydrolase obtained by the method; and a process for the production of D-.alpha.-amino acids with the aid of an action of the enzyme. The D-N-carbamoyl-.alpha.-amino acid amidohydrolase can be fixed on a support for immobilization and used as an immobilized enzyme.

摘要翻译： 本发明涉及与D-N-氨基甲酰基-α-氨基酸酰胺水解酶相关的基因，其是能够将D-N-氨基甲酰基-α-氨基酸转化为D-α-氨基酸的酶; 将含有该基因的DNA片段并入载体的重组质粒; 通过将重组质粒并入而转化的属于埃希氏杆菌属，假单胞菌属，黄杆菌属，芽孢杆菌属，沙雷氏菌属，棒状杆菌属或短杆菌属的微生物; 制备D-N-氨基甲酰基-α-氨基酸酰胺水解酶的方法，包括培养转化的微生物并从其中收集所需产物的步骤; 通过该方法获得的D-N-氨基甲酰基-α-氨基酸酰胺水解酶; 以及借助于酶的作用生产D-氨基酸的方法。 D-N-氨基甲酰基-α-氨基酸酰胺水解酶可以固定在用于固定的载体上并用作固定化酶。

公开(公告)号：US5902736A

公开(公告)日：1999-05-11

申请号：US244657

申请日：1994-06-06

申请人： Hideaki Yamada ,  Sakayu Shimizu ,  Yasuhiro Ikenaka ,  Kazuyoshi Yajima ,  Yukio Yamada ,  Hirokazu Nanba ,  Masayuki Takano ,  Satomi Takahashi

发明人： Hideaki Yamada ,  Sakayu Shimizu ,  Yasuhiro Ikenaka ,  Kazuyoshi Yajima ,  Yukio Yamada ,  Hirokazu Nanba ,  Masayuki Takano ,  Satomi Takahashi

IPC分类号： C12P13/04 ,  C12P41/00 ,  C07C1/04

CPC分类号： C12P13/04 ,  C12P41/009 ,  Y10S435/874 ,  Y10S435/911

摘要： In a process for the production of a D-.alpha.-amino acid, in which an N-carbamyl-D-.alpha.-amino acid corresponding to the general formula: ##STR1## wherein R represents phenyl, hydroxy-substituted phenyl, substituted or unsubstituted alkyl, or thienyl, is converted by a microbial enzyme in an aqueous medium to a D-.alpha.-amino acid corresponding to the general formula: ##STR2## wherein R is the same as defined above, decarbamylase produced by a microorganism of the genus Comamonas, Blastobacter, Alcaligenes, Sporosarcina, Rhizobium, Bradyrhizobium or Arthrobacter is used as the enzyme converting the N-carbamyl-D-.alpha.-amino acid to the D-.alpha.-amino acid.The conversion of the N-carbamyl-D-.alpha.-amino acids to the D-.alpha.-amino acids is carried out in a neutral to alkaline pH range.

摘要翻译： PCT No.PCT / JP93 / 01408 Sec。 371日期：1994年6月6日 102（e）日期1994年6月6日PCT提交1993年10月1日PCT公布。 公开号WO94 / 08030 日期1994年4月14日在制备D-氨基酸的方法中，其中N-氨基甲酰基-D-α-氨基酸对应于通式：其中R表示苯基，羟基取代的苯基，取代的 或未取代的烷基或噻吩基通过微生物酶在水性介质中转化成对应于以下通式的D-α-氨基酸：其中R与上述定义相同，由Comamonas属的微生物产生的脱氨基甲酰酶， 使用喷杆菌属，产碱杆菌属，孢子体菌属，根瘤菌属，Bradyrhizobium或节杆菌作为将N-氨基甲酰基-D-α-氨基酸转化为D-氨基酸的酶。 N-氨基甲酰基-D-α-氨基酸向D-α-氨基酸的转化在中性至碱性pH范围内进行。

公开(公告)号：US6083752A

公开(公告)日：2000-07-04

申请号：US876398

申请日：1997-06-16

申请人： Yasuhiro Ikenaka ,  Hirokazu Nanba ,  Masayuki Takano ,  Kazuyoshi Yajima ,  Yukio Yamada ,  Satomi Takahashi

发明人： Yasuhiro Ikenaka ,  Hirokazu Nanba ,  Masayuki Takano ,  Kazuyoshi Yajima ,  Yukio Yamada ,  Satomi Takahashi

IPC分类号： C12N9/80 ,  C12N15/55 ,  C12N15/72 ,  C12P13/06 ,  C12P13/08 ,  C12P13/22 ,  C12N15/00 ,  C12N5/10 ,  C12N9/14

CPC分类号： C12N15/72 ,  C12N9/80 ,  C12P13/06 ,  C12P13/08 ,  C12P13/22

摘要： A DNA fragment coding for a decarbamylase protein improved in thermostability as the result of replacement of at least one base of a DNA fragment coding for a decarbamylase protein derived from a microorganism with another base and the resultant replacement of at least one of the corresponding amino acids, and its production process; a vector containing the DNA fragment; a transformant obtained by transformation with the vector; as well as a decarbamylase improved in thermostability and its production process. Also disclosed is a process for producing a D-.alpha.-amino acid, which comprises converting an N-carbamoyl-D-.alpha.-amino acid into the corresponding D-.alpha.-amino acid in an aqueous medium by the action of a decarbamylase having a thermostable temperature of 65.degree. C. or higher; and collecting the D-.alpha.-amino acid produced.

摘要翻译： 由于将来自微生物的脱氨基甲酰酶蛋白质的至少一个碱基替换为另一碱基的氨基酸残基的至少一个碱基，所以替代了至少一个相应的氨基酸 ，及其生产工艺; 含有DNA片段的载体; 通过用载体转化获得的转化体; 以及改进了热稳定性的脱氨基甲酰酶及其制备方法。 还公开了一种制备D-α-氨基酸的方法，该方法包括通过脱氨基甲酰酶的作用将N-氨基甲酰基-D-α-氨基酸转化成水性介质中的相应的D- 耐热温度在65℃以上; 并收集产生的D-α-氨基酸。

公开(公告)号：US5565344A

公开(公告)日：1996-10-15

申请号：US917111

申请日：1992-08-07

申请人： Hirokazu Nanba ,  Yukio Yamada ,  Masayuki Takano ,  Yasuhiro Ikenaka ,  Satomi Takahashi ,  Kazuyoshi Yajima

发明人： Hirokazu Nanba ,  Yukio Yamada ,  Masayuki Takano ,  Yasuhiro Ikenaka ,  Satomi Takahashi ,  Kazuyoshi Yajima

IPC分类号： C12N1/21 ,  C12N9/80 ,  C12N15/55 ,  C12P13/04 ,  C12P41/00 ,  C07H19/00 ,  C12N1/12 ,  C12N9/14

CPC分类号： C12P41/009 ,  C12N9/80 ,  C12P13/04

摘要： The present invention is directed to a gene which is related to a D-N-carbamoyl-.alpha.-amino acid amidohydrolase which is an enzyme capable of converting D-N-carbamoyl-.alpha.-amino acids into D-.alpha.-amino acids; a recombinant plasmid in which a DNA fragment containing the gene is incorporated into a vector; a microorganism belonging to the genus Escherichia, Pseudomonas, Flavobacterium, Bacillus, Serratia, Corynebacterium, or Brevibacterium, which is transformed by incorporating the recombinant plasmid thereinto; a process for the production of D-N-carbamoyl-.alpha.-amino acid amidohydrolases, comprising the steps of cultivating the transformed microorganism and collecting the desired product therefrom; a D-N-carbamoyl-.alpha.-amino acid amidohydrolase obtained by the method; and a process for the production of D-.alpha.-amino acids with the aid of an action of the enzyme.The D-N-carbamoyl-.alpha.-amino acid amidohydrolase can be fixed on a support for immobilization and used as an immobilized enzyme.

摘要翻译： PCT No.PCT / JP91 / 01696 Sec。 371日期：1992年8月7日 102（e）日期1992年8月7日PCT 1991年12月6日PCT PCT。 出版物WO92 / 10579 日期1992年6月25日本发明涉及与能够将D-N-氨基甲酰基-α-氨基酸转化为D-氨基酸的酶的D-N-氨基甲酰基-α-氨基酸酰胺水解酶相关的基因。 将含有该基因的DNA片段并入载体的重组质粒; 通过将重组质粒并入而转化的属于埃希氏杆菌属，假单胞菌属，黄杆菌属，芽孢杆菌属，沙雷氏菌属，棒状杆菌属或短杆菌属的微生物; 制备D-N-氨基甲酰基-α-氨基酸酰胺水解酶的方法，包括培养转化的微生物并从其中收集所需产物的步骤; 通过该方法获得的D-N-氨基甲酰基-α-氨基酸酰胺水解酶; 以及借助于酶的作用生产D-氨基酸的方法。 D-N-氨基甲酰基-α-氨基酸酰胺水解酶可以固定在用于固定的载体上并用作固定化酶。

公开(公告)号：US5962279A

公开(公告)日：1999-10-05

申请号：US596144

申请日：1996-08-16

申请人： Hirokazu Nanba ,  Yukio Yamada ,  Kazuyoshi Yajima ,  Masayuki Takano ,  Yasuhiro Ikenaka ,  Satomi Takahashi ,  Takehisa Ohashi

发明人： Hirokazu Nanba ,  Yukio Yamada ,  Kazuyoshi Yajima ,  Masayuki Takano ,  Yasuhiro Ikenaka ,  Satomi Takahashi ,  Takehisa Ohashi

IPC分类号： C12P13/04 ,  C12P41/00 ,  C12N11/00

CPC分类号： C12P13/04 ,  C12P41/009

摘要： A process for the efficient production of a D-amino acid from the corresponding DL-5-substituted hydantoin by one-step reaction which comprises using a composite immobilized enzyme at a pH about neutrality, said composite immobilized enzyme being obtained by immobilizing a hydantoinase having its optimal pH within an alkaline range and a D-N-carbamyl-.alpha.-amino acid amidohydrolase having its optimal pH about neutrality in a coexisting state on an immobilizing support, simultaneously, is disclosed.

摘要翻译： PCT No.PCT / JP95 / 01257第 371日期：1996年8月16日 102（e）日期1996年8月16日PCT提交1995年6月23日PCT公布。 公开号WO96 / 00296 日期1996年1月4日一种通过一步反应从相应的DL-5-取代的乙内酰脲有效生产D-氨基酸的方法，其包括在pH约为中性的情况下使用复合固定化酶，所述复合固定化酶得到 通过将其最佳pH在碱性范围内的乙内酰脲固定化，并且同时具有在共存状态下具有最佳pH约中性的DN-氨基甲酰-α-氨基酸酰胺水解酶。

公开(公告)号：US5863785A

公开(公告)日：1999-01-26

申请号：US479639

申请日：1995-06-07

申请人： Hideaki Yamada ,  Sakayu Shimizu ,  Yasuhiro Ikenaka ,  Kazuyoshi Yajima ,  Yukio Yamada ,  Hirokazu Nanba ,  Masayuki Takano ,  Satomi Takahashi

发明人： Hideaki Yamada ,  Sakayu Shimizu ,  Yasuhiro Ikenaka ,  Kazuyoshi Yajima ,  Yukio Yamada ,  Hirokazu Nanba ,  Masayuki Takano ,  Satomi Takahashi

IPC分类号： C12P13/04 ,  C12P41/00 ,  C12N9/78 ,  C12N9/80

CPC分类号： C12P13/04 ,  C12P41/009 ,  Y10S435/874 ,  Y10S435/911

摘要： In a process for the production of a D-.alpha.-amino acid, in which an N-carbamyl-D-.alpha.-amino acid corresponding to the general formula: ##STR1## wherein R represents phenyl, hydroxy-substituted phenyl, substituted or unsubstituted alkyl, or thienyl, is converted by a microbial enzyme in an aqueous medium to a D-.alpha.-amino acid corresponding to the general formula: ##STR2## wherein R is the same as defined above, decarbamylase produced by a microorganism of the genus Comamonas, Blastobacter, Alcaligenes, Sporosarcina, Rhizobium, Bradyrhizobium or Arthrobacter is used as the enzyme converting the N-carbamyl-D-.alpha.-amino acid to the D-.alpha.-amino acid.The conversion of the N-carbamyl-D-.alpha.-amino acids to the D-.alpha.-amino acids is carried out in a neutral to alkaline pH range.

摘要翻译： 在制备D-α-氨基酸的方法中，其中相应于通式为：苯基，取代或未取代的烷基或噻吩基的N-氨基甲酰基-D-α-氨基酸被转化 通过微生物酶在水性介质中与对应于以下通式的D-α-氨基酸反应：其中R与上述定义相同，由Comamonas属，Blastobacter，Alcaligenes，Sporosarcina属的微生物产生的脱氨基甲酰酶， 使用根瘤菌，Bradyrhizobium或节杆菌作为将N-氨基甲酰基-D-α-氨基酸转化为D-α-氨基酸的酶。 N-氨基甲酰基-D-α-氨基酸向D-α-氨基酸的转化在中性至碱性pH范围内进行。

公开(公告)号：US4925969A

公开(公告)日：1990-05-15

申请号：US324497

申请日：1989-03-16

申请人： Satomi Takahashi ,  Yasuyoshi Ueda ,  Kazuhiko Yamada ,  Yukio Yamada ,  Takehiko Yamane ,  Yoshifumi Yanagita ,  Yoshio Shimada ,  Kiyoshi Watanabe ,  Michio Nomura ,  Takehisa Ohashi ,  Kenji Inoue

发明人： Satomi Takahashi ,  Yasuyoshi Ueda ,  Kazuhiko Yamada ,  Yukio Yamada ,  Takehiko Yamane ,  Yoshifumi Yanagita ,  Yoshio Shimada ,  Kiyoshi Watanabe ,  Michio Nomura ,  Takehisa Ohashi ,  Kenji Inoue

IPC分类号： C07C227/08 ,  C07C233/46 ,  C07C271/06

CPC分类号： C07C233/46 ,  C07C227/08 ,  C07C271/06

摘要： Ethyl-.beta.-benzoyacrylate is reacted with an alkali metal salt of (S)-alanine or an alkali metal salt of N.sup.6 -trifluoroacetyl-L-lysine to form the corresponding Michael addition product, and not less than an equivalent amount of acid is added after completion of the Michael addition to prevent conversion of the (S,S) form of the product to the (R,S) form.

摘要翻译： 乙基-β-苯甲酸酯与（S） - 丙氨酸的碱金属盐或N6-三氟乙酰基-L-赖氨酸的碱金属盐反应形成相应的迈克尔加成产物，加入不少于等量的酸 完成迈克尔加成以防止（S，S）形式的产物转化为（R，S）形式。

公开(公告)号：US06346402B1

公开(公告)日：2002-02-12

申请号：US09582764

申请日：2000-06-30

申请人： Akira Iwasaki ,  Yukio Yamada ,  Yasuhiro Ikenaka ,  Yoshihiko Yasohara ,  Junzo Hasegawa

发明人： Akira Iwasaki ,  Yukio Yamada ,  Yasuhiro Ikenaka ,  Yoshihiko Yasohara ,  Junzo Hasegawa

IPC分类号： C12P1304

CPC分类号： C12N9/1096 ,  C12P41/006

摘要： Relating to an enzyme capable of efficiently converting a ketone compound to an optically active amino compound by transamination, and a process for preparing an optically active amino compound using the enzyme. An (S)-&agr;-phenethylamine:pyruvate transaminase, which acts on (S)-&agr;-phenethylamine and a ketone compound, thereby catalyzing transamination for forming acetophenone and an amino compound corresponding to the ketone compound; a process for preparing an optically active amino compound using the transaminase; and a method for culturing a microorganism for producing the above transaminase, comprising adding to a medium one or more compounds selected from the group consisting of propylamine, 1-butylamine, 2-butylamine, 2-pentylamine, isopropylamine and isobutylamine as an inducer for the enzyme when a microorganism for producing (S)-&agr;-phenethylamine:pyruvate transaminase is cultured.

摘要翻译： 关于能够通过转氨酶有效地将酮化合物转化为光学活性氨基化合物的酶，以及使用该酶制备光学活性氨基化合物的方法。 （S）-α-苯乙胺：丙酮酸转氨酶，其作用于（S）-α-苯乙胺和酮化合物，从而催化转氨酶形成苯乙酮和对应于酮化合物的氨基化合物; 使用转氨酶制备光学活性氨基化合物的方法; 以及培养用于制备上述转氨酶的微生物的方法，包括向培养基中加入一种或多种选自丙胺，1-丁胺，2-丁胺，2-戊胺，异丙胺和异丁胺的化合物作为诱导剂 用于生产（S）-α-苯乙胺：丙酮酸转氨酶的微生物培养时的酶。

公开(公告)号：US07169592B2

公开(公告)日：2007-01-30

申请号：US10112706

申请日：2002-04-02

申请人： Yukio Yamada ,  Akira Iwasaki ,  Noriyuki Kizaki ,  Keiji Matsumoto ,  Yasuhiro Ikenaka ,  Masahiro Ogura ,  Junzo Hasegawa

发明人： Yukio Yamada ,  Akira Iwasaki ,  Noriyuki Kizaki ,  Keiji Matsumoto ,  Yasuhiro Ikenaka ,  Masahiro Ogura ,  Junzo Hasegawa

IPC分类号： C12N9/10 ,  C12N1/21 ,  C12N15/54 ,  C12N15/63 ,  C12N15/82 ,  C12N15/85 ,  C07H21/04

CPC分类号： C12P13/001 ,  C12N9/1096

摘要： To provide a method for preparing optically active compounds, which mainly contain (R)-amino compounds, by microbial enzymes efficiently and inexpensively; a polypeptide having stereoselective transaminase activity which can be suitably used for the above preparation method; and a DNA encoding the polypeptide. A method for preparing an optically active amino compound, characterized in stereoselectively transaminating by acting a transaminase on an amino group acceptor, a ketone compound in the presence of an amino group donor, a primary amine; a DNA comprising a nucleotide sequence encoding a polypeptide having stereoselective transaminase activity; and a polypeptide having stereoselective transaminase activity obtainable from a culture of a microorganism belonging to the genus Arthrobacter.

摘要翻译： 提供通过微生物酶有效且廉价地制备主要含有（R） - 氨基化合物的光学活性化合物的方法; 具有立体选择性转氨酶活性的多肽，可适用于上述制备方法; 和编码该多肽的DNA。 一种制备光学活性氨基化合物的方法，其特征在于通过在氨基受体上起转氨酶的作用，在氨基供体存在下的酮化合物，伯胺，立体选择性转氨酶; 包含编码具有立体选择性转氨酶活性的多肽的核苷酸序列的DNA; 和具有立体选择性转氨酶活性的多肽，其可从属于节杆菌属的微生物的培养物获得。